Electroforesis Como Bases Para Estudios de Proteómica

• Parte teórica:

I. Principios generales de la migración electroforética:

1. Compuestos anfotéricos (zwiteriones).
2. pH isoeléctrico.
3. Comportamiento de los anfoteritos y las moléculas cargadas bajo la acción de un campo eléctrico.
Objetivo específico: que el estudiante adquiera los conocimientos básicos necesarios que le permitan entender el principio de la migración electroforética.

II. El papel de la electroforesis en la proteómica.

1. Uso de la electroforesis en la proteómica
2. Las diferentes técnicas electroforéticas empleadas en la proteómica.
Sistemas no desnaturalizantes o nativos.
Sistemas desnaturalizantes (PAGE-SDS).
Sistemas continuos y discontinuos
Isotacoforesis
Electroenfoque.
Geles de dos dimensiones. El sistema de O´Farrell.
3. Casos particulares de la electroforesis de proteínas en geles de poliacrilamida.
Zimografía. Principios y usos.
Ensayo del cambio en la movilidad electroforética (EMSA).
Western blot.
Inmunoelectroforesis.
Objetivo específico: que el estudiante conozca los tipos de electroforesis de proteínas en geles de poliacrilamida, así como su aplicación y usos potenciales para la investigación
4. Determinación de proteínas.
Abosrbancia 280
Absorbancia 215
Lowry
Bradford
Peterson
Comassie
Bichinconínico
Objetivos específicos: que el alumno sea capaz de discernir entre los diferentes métodos que existen para la determinación de proteínas cual es el más adecuado para las necesidades particulares de su investigación.

• Parte práctica

1. Extracción de la muestra.
2. Preparación de la muestra.
3. Determinación de proteínas.
4. Preparación de los geles para las corridas electroforéticas.
5. Corrida de las muestras por electroenfoque